John Wilkes Booth (Bel Air (Maryland), 10 mei 1838 – Bowling Green (Virginia), 26 april 1865) was een Amerikaans acteur die wereldberoemd werd, nadat hij Abraham Lincoln vermoord had.
John Wilkes Booth werd geboren op een boerderij in Maryland. Zijn ouders waren Engels en emigreerden in 1821 naar de Verenigde Staten.
Begin 1862 werd Booth gearresteerd en in St. Louis berecht wegens het uiten van kritiek op de overheid.
Op Goede Vrijdag, 14 april 1865, kort nadat Robert E. Lee zich had overgegeven, was President Lincoln aanwezig in Ford's Theatre in Washington D.C.. Booth schoot Lincoln achter in het hoofd met een .44 kaliber Derringer pistool. Volgens sommige bronnen riep hij daarna "Sic semper tyrannis", net zoals Brutus bij de moord op Julius Caesar.
Booth wist hierop te ontkomen maar werd twaalf dagen later, na een klopjacht van de cavalerie, opgespoord in Virginia waar hij zich schuilhield in een tabaksschuur. Hij wilde zich niet overgeven, waarop de schuur in brand werd gestoken. Omdat een sergeant van de cavalerie vermoedde dat Booth vanuit de brandende schuur het vuur op de soldaten zou kunnen openen, schoot deze hem door een kier neer. De dodelijk gewonde Booth werd vervolgens uit de schuur gehaald en stierf enkele uren later. De medestander die hem had geholpen bij zijn vlucht en die hem onderdak had verschaft werd ter dood veroordeeld en opgehangen.
Cherie Blair, geboren als Cherie Booth, de vrouw van de voormalige Britse premier Tony Blair, is een verre verwant van John Wilkes Booth.